செல் கலாச்சார சூழல் செல் உற்பத்தியை பாதிக்கிறது

செல் கலாச்சாரத்தின் முக்கிய நன்மைகளில் ஒன்று, உயிரணு இனப்பெருக்கம் (அதாவது வெப்பநிலை, pH, ஆஸ்மோடிக் அழுத்தம், O2 மற்றும் CO2 பதற்றம்) மற்றும் உடலியல் சூழல் (அதாவது ஹார்மோன் மற்றும் ஊட்டச்சத்து செறிவு) ஆகியவற்றின் இயற்பியல் வேதியியல் கையாளும் திறன் ஆகும்.வெப்பநிலைக்கு கூடுதலாக, கலாச்சார சூழல் வளர்ச்சி ஊடகத்தால் கட்டுப்படுத்தப்படுகிறது.

கலாச்சாரத்தின் உடலியல் சூழல் அதன் இயற்பியல் மற்றும் வேதியியல் சூழலைப் போல தெளிவாக இல்லை என்றாலும், சீரம் கூறுகளைப் பற்றிய சிறந்த புரிதல், பெருக்கத்திற்குத் தேவையான வளர்ச்சி காரணிகளை அடையாளம் காண்பது மற்றும் கலாச்சாரத்தில் உயிரணுக்களின் நுண்ணிய சூழலைப் பற்றிய சிறந்த புரிதல்.(அதாவது செல்-செல் தொடர்பு, வாயு பரவல், மேட்ரிக்ஸுடனான தொடர்பு) இப்போது சில செல் கோடுகளை சீரம் இல்லாத ஊடகத்தில் வளர்க்க அனுமதிக்கிறது.

1.கலாச்சார சூழல் செல் வளர்ச்சியை பாதிக்கிறது
ஒவ்வொரு செல் வகைக்கும் செல் கலாச்சார நிலைமைகள் வேறுபட்டவை என்பதை நினைவில் கொள்ளவும்.
ஒரு குறிப்பிட்ட செல் வகைக்கு தேவையான கலாச்சார நிலைமைகளிலிருந்து விலகுவதால் ஏற்படும் விளைவுகள், அசாதாரண பினோடைப்களின் வெளிப்பாடு முதல் செல் கலாச்சாரத்தின் முழுமையான தோல்வி வரை இருக்கும்.எனவே, நீங்கள் ஆர்வமுள்ள செல் லைனைப் பற்றி நன்கு தெரிந்துகொள்ளவும், உங்கள் பரிசோதனையில் நீங்கள் பயன்படுத்தும் ஒவ்வொரு தயாரிப்புக்கும் வழங்கப்பட்ட வழிமுறைகளை கண்டிப்பாகப் பின்பற்றவும் பரிந்துரைக்கிறோம்.

2.உங்கள் கலங்களுக்கு உகந்த செல் கலாச்சார சூழலை உருவாக்குவதற்கான முன்னெச்சரிக்கைகள்:
கலாச்சார ஊடகம் மற்றும் சீரம் (மேலும் தகவலுக்கு கீழே பார்க்கவும்)
pH மற்றும் CO2 அளவுகள் (மேலும் தகவலுக்கு கீழே பார்க்கவும்)
பிளாஸ்டிக் பயிரிடவும் (மேலும் தகவலுக்கு கீழே பார்க்கவும்)
வெப்பநிலை (மேலும் தகவலுக்கு கீழே பார்க்கவும்)

2.1 கலாச்சார ஊடகம் மற்றும் சீரம்
கலாச்சார ஊடகம் கலாச்சார சூழலின் மிக முக்கியமான பகுதியாகும், ஏனெனில் இது உயிரணு வளர்ச்சிக்கு தேவையான ஊட்டச்சத்துக்கள், வளர்ச்சி காரணிகள் மற்றும் ஹார்மோன்களை வழங்குகிறது, மேலும் கலாச்சாரத்தின் pH மற்றும் ஆஸ்மோடிக் அழுத்தத்தை ஒழுங்குபடுத்துகிறது.

திசு சாறுகள் மற்றும் உடல் திரவங்களிலிருந்து பெறப்பட்ட இயற்கை ஊடகத்தைப் பயன்படுத்தி ஆரம்ப செல் வளர்ப்பு சோதனைகள் மேற்கொள்ளப்பட்டாலும், தரப்படுத்தலின் தேவை, ஊடகத் தரம் மற்றும் அதிகரித்த தேவை ஆகியவை உறுதியான ஊடகத்தின் வளர்ச்சிக்கு வழிவகுத்தது.மூன்று அடிப்படை வகை ஊடகங்கள் அடிப்படை ஊடகம், குறைக்கப்பட்ட சீரம் ஊடகம் மற்றும் சீரம் இல்லாத ஊடகம், மேலும் அவை சீரம் நிரப்புதலுக்கான வெவ்வேறு தேவைகளைக் கொண்டுள்ளன.

2.1.1 அடிப்படை ஊடகம்
கிப்கோ செல் கலாச்சார ஊடகம்
பெரும்பாலான செல் கோடுகள் அமினோ அமிலங்கள், வைட்டமின்கள், கனிம உப்புகள் மற்றும் கார்பன் மூலங்கள் (குளுக்கோஸ் போன்றவை) கொண்ட அடிப்படை ஊடகங்களில் நன்றாக வளரும், ஆனால் இந்த அடிப்படை ஊடக சூத்திரங்கள் சீரம் மூலம் கூடுதலாக இருக்க வேண்டும்.

2.1.2 குறைக்கப்பட்ட சீரம் நடுத்தர
கிப்கோ குறைந்த சீரம் மீடியம் கொண்ட பாட்டில்
செல் வளர்ப்பு சோதனைகளில் சீரம் பாதகமான விளைவுகளை குறைப்பதற்கான மற்றொரு உத்தி சீரம் குறைக்கப்பட்ட மீடியாவைப் பயன்படுத்துவதாகும்.குறைக்கப்பட்ட சீரம் மீடியம் என்பது ஊட்டச்சத்துக்கள் மற்றும் விலங்குகளில் இருந்து பெறப்பட்ட காரணிகள் நிறைந்த ஒரு அடிப்படை நடுத்தர சூத்திரமாகும், இது தேவையான சீரம் அளவைக் குறைக்கும்.

2.1.3 சீரம் இல்லாத ஊடகம்
கிப்கோ சீரம் இல்லாத மீடியம் கொண்ட பாட்டில்
சீரம் இல்லாத ஊடகம் (SFM) சீரம் சரியான ஊட்டச்சத்து மற்றும் ஹார்மோன் கலவைகளை மாற்றுவதன் மூலம் விலங்கு சீரம் பயன்படுத்துவதை தவிர்க்கிறது.சீன வெள்ளெலி கருப்பை (CHO) மறுசீரமைப்பு புரத உற்பத்தி வரி, பல்வேறு கலப்பின செல் கோடுகள், பூச்சிக் கோடுகள் Sf9 மற்றும் Sf21 (Spodoptera frugiperda), அத்துடன் வைரஸ் உற்பத்திக்கான ஹோஸ்ட் உட்பட பல முதன்மை கலாச்சாரங்கள் மற்றும் செல் கோடுகள் சீரம் இல்லாத நடுத்தர சூத்திரங்களைக் கொண்டுள்ளன. (உதாரணமாக, 293, VERO, MDCK, MDBK), முதலியன. சீரம் இல்லாத ஊடகத்தைப் பயன்படுத்துவதன் முக்கிய நன்மைகளில் ஒன்று, வளர்ச்சிக் காரணிகளின் பொருத்தமான கலவையைத் தேர்ந்தெடுப்பதன் மூலம் குறிப்பிட்ட செல் வகைகளுக்குத் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட ஊடகத்தை உருவாக்கும் திறன் ஆகும்.சீரம் இல்லாத மீடியாவின் நன்மைகள் மற்றும் தீமைகளை பின்வரும் அட்டவணை பட்டியலிடுகிறது.

நன்மை
தெளிவை அதிகரிக்கவும்
மேலும் நிலையான செயல்திறன்
எளிதான சுத்திகரிப்பு மற்றும் கீழ்நிலை செயலாக்கம்
செல் செயல்பாட்டை துல்லியமாக மதிப்பிடுங்கள்
உற்பத்தித்திறனை அதிகரிக்கவும்
உடலியல் எதிர்வினைகளின் சிறந்த கட்டுப்பாடு
மேம்படுத்தப்பட்ட செல் மீடியா கண்டறிதல்
பாதகம்
செல் வகை குறிப்பிட்ட நடுத்தர சூத்திர தேவைகள்
அதிக ரியாஜென்ட் தூய்மை தேவை
வளர்ச்சியில் மந்தம்

2.2.1 pH நிலை
பெரும்பாலான சாதாரண பாலூட்டிகளின் செல் கோடுகள் pH 7.4 இல் நன்றாக வளரும், மேலும் வெவ்வேறு செல் கோடுகளுக்கு இடையிலான வேறுபாடுகள் சிறியதாக இருக்கும்.இருப்பினும், சில மாற்றப்பட்ட செல் கோடுகள் சற்று அமில சூழலில் (pH 7.0 - 7.4) சிறப்பாக வளரும் என்று காட்டப்பட்டுள்ளது, சில சாதாரண ஃபைப்ரோபிளாஸ்ட் செல் கோடுகள் சற்று கார சூழலை விரும்புகின்றன (pH 7.4 - 7.7).Sf9 மற்றும் Sf21 போன்ற பூச்சி செல் கோடுகள் pH 6.2 இல் சிறப்பாக வளரும்.

2.2.2 CO2 நிலை
வளர்ச்சி ஊடகம் கலாச்சாரத்தின் pH ஐக் கட்டுப்படுத்துகிறது மற்றும் pH இன் மாற்றங்களை எதிர்க்க கலாச்சாரத்தில் உள்ள செல்களை தாங்குகிறது.வழக்கமாக, இந்த இடையகமானது கரிம (உதாரணமாக, HEPES) அல்லது CO2-பைகார்பனேட் அடிப்படையிலான இடையகங்களைக் கொண்டிருப்பதன் மூலம் அடையப்படுகிறது.ஊடகத்தின் pH ஆனது கரைந்த கார்பன் டை ஆக்சைடு (CO2) மற்றும் பைகார்பனேட் (HCO3-) ஆகியவற்றின் நுட்பமான சமநிலையைப் பொறுத்தது என்பதால், வளிமண்டல CO2 இல் ஏற்படும் மாற்றங்கள் ஊடகத்தின் pH ஐ மாற்றும்.எனவே, ஒரு CO2-பைகார்பனேட் அடிப்படையிலான இடையகத்துடன் இடையகத்தைப் பயன்படுத்தும் போது, ​​வெளிப்புற CO2 ஐப் பயன்படுத்துவது அவசியம், குறிப்பாக திறந்த கலாச்சார உணவுகளில் செல்களை வளர்ப்பது அல்லது அதிக செறிவுகளில் மாற்றப்பட்ட செல் கோடுகளை வளர்ப்பது.பெரும்பாலான ஆராய்ச்சியாளர்கள் பொதுவாக காற்றில் 5-7% CO2 ஐப் பயன்படுத்தினாலும், பெரும்பாலான செல் கலாச்சார சோதனைகள் பொதுவாக 4-10% CO2 ஐப் பயன்படுத்துகின்றன.இருப்பினும், ஒவ்வொரு ஊடகமும் சரியான pH மற்றும் ஆஸ்மோடிக் அழுத்தத்தை அடைய பரிந்துரைக்கப்பட்ட CO2 பதற்றம் மற்றும் பைகார்பனேட் செறிவு உள்ளது;மேலும் தகவலுக்கு, நடுத்தர உற்பத்தியாளரின் வழிமுறைகளைப் பார்க்கவும்.

2.3 பிளாஸ்டிக் பயிரிடுதல்
செல் கலாச்சார பிளாஸ்டிக்குகள் பல்வேறு செல் கலாச்சார பயன்பாடுகளுக்கு ஏற்ப பல்வேறு வடிவங்கள், அளவுகள் மற்றும் பரப்புகளில் கிடைக்கின்றன.உங்கள் செல் கலாச்சார பயன்பாட்டிற்கான சரியான பிளாஸ்டிக்கைத் தேர்வுசெய்ய உதவுவதற்கு கீழே உள்ள செல் கலாச்சார பிளாஸ்டிக் மேற்பரப்பு வழிகாட்டி மற்றும் செல் கலாச்சார கொள்கலன் வழிகாட்டியைப் பயன்படுத்தவும்.
அனைத்து தெர்மோ சயின்டிஃபிக் Nunc செல் கலாச்சார பிளாஸ்டிக்குகளையும் காண்க (விளம்பர இணைப்பு)

2.4 வெப்பநிலை
உயிரணு வளர்ப்பிற்கான உகந்த வெப்பநிலையானது, செல்கள் தனிமைப்படுத்தப்பட்ட ஹோஸ்டின் உடல் வெப்பநிலையை பெருமளவில் சார்ந்துள்ளது, மேலும் குறைந்த அளவிற்கு வெப்பநிலையில் ஏற்படும் உடற்கூறியல் மாற்றங்களைப் பொறுத்தது (உதாரணமாக, தோல் வெப்பநிலை எலும்பு தசையை விட குறைவாக இருக்கலாம். )செல் கலாச்சாரத்தைப் பொறுத்தவரை, அதிக வெப்பமடைவதை விட அதிக வெப்பம் மிகவும் கடுமையான பிரச்சனையாகும்.எனவே, இன்குபேட்டரில் வெப்பநிலை பொதுவாக உகந்த வெப்பநிலையை விட சற்று குறைவாக அமைக்கப்படுகிறது.

2.4.1 பல்வேறு செல் கோடுகளுக்கு உகந்த வெப்பநிலை
பெரும்பாலான மனித மற்றும் பாலூட்டிகளின் செல் கோடுகள் உகந்த வளர்ச்சிக்காக 36°C முதல் 37°C வரை வைக்கப்படுகின்றன.
பூச்சி செல்கள் உகந்த வளர்ச்சிக்காக 27 டிகிரி செல்சியஸ் பயிரிடப்படுகின்றன;குறைந்த வெப்பநிலை மற்றும் 27°C மற்றும் 30°C இடையே வெப்பநிலையில் அவை மெதுவாக வளரும்.30 டிகிரி செல்சியஸுக்கு மேல், பூச்சி செல்களின் உயிர்ச்சக்தி குறைகிறது, அது 27 டிகிரி செல்சியஸ் திரும்பினாலும், செல்கள் மீட்கப்படாது.
பறவை செல் கோடுகள் அதிகபட்ச வளர்ச்சியை அடைய 38.5 டிகிரி செல்சியஸ் தேவை.இந்த செல்களை 37 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் வைத்திருக்க முடியும் என்றாலும், அவை மெதுவாக வளரும்.
குளிர்-இரத்தம் கொண்ட விலங்குகளிடமிருந்து பெறப்பட்ட செல் கோடுகள் (நீர்வீழ்ச்சிகள், குளிர்ந்த நீர் மீன் போன்றவை) 15 ° C முதல் 26 ° C வரையிலான பரந்த வெப்பநிலை வரம்பைத் தாங்கும்.